國家藥監(jiān)局
關于發(fā)布腫瘤相關突變基因檢測試劑和CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑
2項注冊技術審查指導原則的通告

（2019年 第83號）

為加強醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊工作的監(jiān)督和指導，進一步提高注冊審查質(zhì)量，國家藥品監(jiān)督管理局組織制定了《腫瘤相關突變基因檢測試劑（高通量測序法）性能評價通用注冊技術審查指導原則》和《CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑注冊技術審查指導原則》，現(xiàn)予發(fā)布。

特此通告。

國家藥監(jiān)局2019年11月12日

【佳學基因】CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑注冊技術審查指導原則

 

本指導原則旨在指導注冊申請人對CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

藥物代謝酶在藥物體內(nèi)代謝過程中起著重要作用，其活性強弱是藥物代謝速率的重要影響因素，直接決定了藥物作用的強度和持久性。人體內(nèi)的藥物代謝酶主要有細胞色素P450（CYP450）同工酶和N-乙酰轉移酶（NAT）等。CYP2C19酶是一種重要的CYP450同工酶，臨床以CYP2C19酶為主要代謝酶的藥物包括抗血小板藥物（如：氯吡格雷）和質(zhì)子泵抑制劑等。氯吡格雷是一種抗血小板藥物，廣泛用于：急性冠脈綜合征（ACS）患者，包括非ST段抬高性ACS（不穩(wěn)定性心絞痛UA或非Q波心肌梗死）和ST段抬高性心肌梗死（NSTEMI）患者，其中，非ST段抬高性ACS包括經(jīng)皮冠狀動脈介入術后置入支架的患者；外周動脈性疾病患者；近期心肌梗死或近期缺血性卒中患者。氯吡格雷作為一種前體藥物，本身并無藥理活性，主要經(jīng)CYP2C19酶代謝活化，產(chǎn)生活性代謝產(chǎn)物，后者與血小板表面的P2Y12受體不可逆結合，抑制血小板聚集，干擾ADP介導的血小板活化，發(fā)揮抗血小板效應。

CYP2C19酶的編碼基因為CYP2C19基因，位于人類10號染色體上。CYP2C19基因含有42個等位基因，CYP2C19*1為野生型等位基因，其編碼的酶具有正?；钚?。CYP2C19*2（rs4244285，c.681G>A）和CYP2C19*3（rs4986893，c.636G>A）編碼的CYP2C19酶活性降低，是中國人群中存在的2種主要的等位基因，在中國人群的發(fā)生頻率分別為23.1%～35%和2%～7%。CYP2C19*17（rs12248560,c.-806C>T）編碼的CYP2C19酶活性增強，在中國人群的發(fā)生頻率約為0.5%～4%。除CYP2C19*2/*3/*17之外，可能影響CYP2C19酶活性的CYP2C19等位基因還包括CYP2C19*4～CYP2C19*8等，但這些等位基因在中國人群的發(fā)生頻率低，其功能與臨床意義有待進一步研究。

CYP2C19基因的遺傳變異導致CYP2C19酶活性的個體差異，使人群出現(xiàn)超快代謝者（UM）、快代謝者（EM）、中間代謝者（IM）和慢代謝者（PM）4種表型。CYP2C19 UM患者應用常規(guī)劑量的氯吡格雷后體內(nèi)生成的活性代謝產(chǎn)物增多，對血小板的抑制作用升高，抗血小板功能增強，出血風險增大。而CYP2C19 PM患者應用常規(guī)劑量的氯吡格雷后體內(nèi)生成的活性代謝產(chǎn)物減少，對血小板的抑制作用下降，抗血小板功能減弱，血栓風險增大。UM個體的基因型可為CYP2C19*17/*17純合型或CYP2C19*1/*17雜合型；EM個體的基因型可為CYP2C19*1/*1純合型；IM個體的基因型可為CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*17或CYP2C19*3/*17雜合型；PM個體的基因型可為CYP2C19*2/*3、CYP2C19*2/*2和CYP2C19*3/*3雜合型或純合型。

通過CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測，可將服藥人群分為上述4類氯吡格雷代謝患者，從而用于氯吡格雷的用藥指導。美國FDA在氯吡格雷藥物說明書中建議：對于CYP2C19 PM患者，可考慮使用其他血小板P2Y12抑制劑。遺傳藥理學知識庫以及臨床遺傳藥理學實施聯(lián)盟（CPIC）發(fā)布的CYP2C19基因型和氯吡格雷用藥指導文件建議：對于CYP2C19 PM患者和IM患者，可選用其它抗血小板藥物（如：普拉格雷或替格瑞洛）進行治療。2015年，原國家衛(wèi)生計生委發(fā)布的《藥物代謝酶和藥物作用靶點基因檢測技術指南（試行）》也建議：對于CYP2C19 PM患者的抗血小板治療，可增加氯吡格雷的劑量或選用其他不經(jīng)CYP2C19代謝的抗血小板藥物（如替格瑞洛）等。

然而，對于哪些氯吡格雷服藥人群需進行CYP2C19基因型檢測，國內(nèi)外尚無統(tǒng)一意見。2013年發(fā)布的《抗血小板治療中國專家共識》建議：CYP2C19基因型檢測臨床應用價值有限，不推薦常規(guī)進行。CPIC在隨后發(fā)布的CYP2C19基因型和氯吡格雷用藥指導文件中建議：基于CYP2C19基因型的氯吡格雷抗血小板治療主要用于進行經(jīng)皮冠狀動脈介入治療的急性冠脈綜合征患者（簡稱為ACS/PCI患者），尚無證據(jù)表明CYP2C19基因型可用于指導氯吡格雷在其他患者中的抗血小板治療。2014年發(fā)布的《抗血小板藥物治療反應多樣性臨床檢測和處理的中國專家建議》建議：不推薦常規(guī)進行CYP2C19基因型檢測，僅對PCI術后血栓高危、且計劃調(diào)整P2Y12抑制劑治療方案的患者，推薦進行血小板功能檢測和CYP2C19基因型檢測。2017年發(fā)布的《基因多態(tài)性與抗栓藥物臨床應用專家建議》建議：CYP2C19基因型檢測主要對缺血高風險/出血高風險患者選用P2Y12抑制劑有參考價值。綜合考慮上述意見并結合中國實際情況，建議將本指導原則的預期適用人群限定為：

正在服用或?qū)⒁寐冗粮窭走M行抗血小板治療的冠心病患者，主要為急性冠脈綜合征（ACS）且進行經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）的患者（ACS/PCI患者）、PCI術后血栓高危且計劃調(diào)整P2Y12抑制劑治療方案的患者、缺血高風險或出血高風險患者等。其中，PCI術后血栓高危患者以及缺血高風險/出血高風險患者的人群限定可參考相關指南。

本指導原則所述CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑是指：利用分子生物學檢測技術，如聚合酶鏈反應（PCR）等，以CYP2C19基因特定序列為檢測靶標，對接受氯吡格雷治療患者的外周靜脈全血或口腔拭子等樣本基因組DNA中的CYP2C19基因多態(tài)性進行體外定性檢測的試劑，用于氯吡格雷的用藥指導。

本指導原則的技術要求是基于熒光探針PCR方法建立的，對于其他分子生物學檢測技術，可能部分要求不有效適用或本文所述技術指標不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學合理性。

本指導原則僅對用于氯吡格雷用藥指導的CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑的相關要求進行了說明，由于CYP2C19參與了多種不同藥物的代謝，對用于其他藥物用藥指導的CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑，可能部分要求不有效適用或本文所述技術指標不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行修訂或補充其他的評價和驗證。

本指導原則適用于進行新穎注冊申報和相關許可事項變更的產(chǎn)品。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、研究結果的總結評價以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應著重從方法學、檢驗原理、賊低檢測限及被測靶標（基因多態(tài)性位點）等方面詳細說明申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。除此之外，還應說明被測靶標純合型和雜合型在中國人群的發(fā)生頻率。

若被測靶標為新的多態(tài)性位點，申請人還應提交支持資料，以證明：1.攜帶新位點等位基因所編碼的CYP2C19酶對氯吡格雷具有預期的代謝活性；2.攜帶新位點等位基因的患者，其血小板功能具有預期的差異；3.接受氯吡格雷治療且攜帶新位點等位基因的患者表現(xiàn)出預期的主要不良心血管事件；4.根據(jù)基因型調(diào)整抗血小板治療方案后，攜帶新位點等位基因的患者預后獲得改善。上述資料應為體內(nèi)臨床試驗數(shù)據(jù)，如：在預期適用人群體內(nèi)進行的酶速率研究試驗，基因型與預期適用人群的主要不良心血管事件關聯(lián)試驗，基因型導向的抗血小板治療試驗等。上述資料必須包括基于中國人群的充分的臨床數(shù)據(jù)。如新位點可用于氯吡格雷用藥指導的結論已獲得行業(yè)承認，應同時提交證明其獲得行業(yè)承認的支持資料。

綜述資料應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑主要原材料研究資料包括主要反應成分、質(zhì)控品及企業(yè)參考品的研究資料。

1. 此類產(chǎn)品的主要反應成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTP、反應緩沖液等。申請人應提交相關原材料的選擇、制備和質(zhì)量標準研究資料。如為申請人自制，應提交詳細的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應提交供應商篩選資料以及供應商提供的原材料質(zhì)量檢定報告。

1.1 核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關的驗證資料。

1.2 引物、探針

本文所述CYP2C19基因多態(tài)性檢測一般針對等位基因CYP2C19*1、CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17。申請人應詳述引物、探針的設計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應情況。建議設計兩套或多套引物探針以供篩選，針對待測位點的檢測靈敏度和特異性等進行評價，選擇賊佳設計，并提交詳細的篩選研究數(shù)據(jù)。同時應針對引物、探針核酸序列及檢測靶序列進行同源性比對，如有同源序列應著重評價是否會有交叉反應。

申請人應針對選定的引物、探針原材料進行質(zhì)量評價，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標記基團的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗等，并依據(jù)評價結果建立合理的質(zhì)量標準。

1.3酶

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑可能涉及到的酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）。申請人應針對各種酶的活性進行驗證，提交功能性試驗資料，并確定酶的質(zhì)量標準。

DNA聚合酶應具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

1.4脫氧三磷酸核苷（dNTP）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗證資料，以及功能性試驗資料，并確定質(zhì)量標準。

2.質(zhì)控品

試劑盒的質(zhì)控體系通過設置各種試劑盒質(zhì)控品來實現(xiàn)。

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑的質(zhì)控品可分別設置野生型、雜合型及純合突變型DNA樣品（至少包含常見的多態(tài)性位點），同時設置不含待測靶序列的空白質(zhì)控品用于交叉污染的質(zhì)控；亦可直接采用常見多態(tài)性位點的雜合型樣品及空白質(zhì)控品進行質(zhì)量控制。

對于此類產(chǎn)品，一般情況下，反應體系中野生型序列和突變型序列均有陽性反應，可以對管內(nèi)抑制導致的假陰性結果進行質(zhì)量控制，則試劑盒中可不另外設置內(nèi)標對照；否則，應另外設置內(nèi)標對照。

質(zhì)控體系應能夠?qū)z測全過程進行有效的質(zhì)量控制，包括試劑及儀器性能、可能的擴增反應抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染等因素造成的假陰性或假陽性結果。質(zhì)控品可采用質(zhì)?；蚺R床樣本的核酸提取液等?？瞻踪|(zhì)控品應參與樣本核酸的平行提取。申請人應針對質(zhì)控品原料選擇、制備、定值過程等提供詳細的研究數(shù)據(jù)，并對質(zhì)控品的檢測結果做出明確的范圍要求。

3.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品、精密度參考品等。申請人應提交有關企業(yè)參考品原料選擇、制備方法、基因序列確認及檢驗標準的研究資料，包括所用到的參考方法等。

3.1陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸提取液，樣本類型與待測樣本一致。應至少包含野生型和所有多態(tài)性位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，需要時也可采用細胞系代替。

3.2陰性參考品：應考慮檢測特異性的評價，納入同源序列交叉反應樣本、干擾樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇賊低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近賊低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸提取液，至少包含所有多態(tài)性位點的雜合型樣本。

3.4精密度參考品應至少包括所有多態(tài)性位點的低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸提取液。

如CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑已有國家參考品，企業(yè)參考品的要求應不低于國家參考品要求。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTP濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標記等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應對關鍵參數(shù)進行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標明關鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標準。

反應體系研究指賊佳反應條件的選擇確定過程，包括樣本采集預處理、樣本保存、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟（如有）、PCR反應條件、閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）等的確定。

不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。

（四）分析性能評估資料

申請人應針對下述各項分析性能提交詳細的評估資料，包括試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認）、試驗可接受標準、統(tǒng)計方法、試驗數(shù)據(jù)及結論等。有關背景信息也應在資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號等。分析性能評估的實驗方法可以參考相關國內(nèi)或國外有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導原則進行。

每項性能評估應盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型也可采用細胞系等。

如產(chǎn)品適用樣本類型不止一種，申請人應針對不同樣本類型分別完成性能評估。

1. 核酸提取/純化性能（如有）

在進行靶核酸檢測前，應有適當?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟除賊大量分離出目的核酸外，還應有相應的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化的組分，企業(yè)都應結合檢測試劑的特性，對配合使用的核酸提取/純化方法的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑的要求，提供詳細的評價資料。

2. 檢測正確性

建議采用若干份臨床樣本驗證CYP2C19基因多態(tài)性試劑的檢測正確性，樣本類型與產(chǎn)品適用范圍一致；樣本應涵蓋野生型和所有多態(tài)性位點的雜合突變、純合突變情況，并包含不同基因組DNA濃度。對于某些基因型樣本較為稀有的情況，亦可采用細胞系代替。

3. 檢測限和可報告范圍

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑的賊低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測正確性和精密度的條件下，能夠檢出目標基因的賊低人基因組DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細胞系，并至少包含所有多態(tài)性位點的雜合突變型。

可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進行多次重復檢測，確定適當檢出率水平（如：95%）下的賊低人基因組DNA濃度，即為賊低檢測限。系列稀釋度應能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（0～100%），可根據(jù)各濃度梯度檢測結果直接判定，也可通過概率計算或其他適當方法進行測算。

同時，申請人亦應評價CYP2C19基因多態(tài)性試劑可正確檢出的人基因組DNA濃度上限，即適當檢出率水平下的賊高人基因組DNA濃度。

4. 分析特異性

4.1 應針對同源性序列（例如CYP2C19的其他突變序列、CYP2C9基因序列等）進行交叉反應驗證，說明交叉反應樣本的制備方法、核酸序列確認方法，提交詳細的驗證資料。

4.2 應針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進行干擾試驗研究。干擾物的選擇與所用樣本類型有關，例如：全血樣本，內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑、常用藥物等；對于口腔拭子樣本，干擾物需考慮全血、口腔定植菌以及口腔可能接觸到的抗菌漱口液、牙膏、食物、藥物、煙草等。

干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價干擾物質(zhì)對目標基因檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在賊大濃度（“賊差條件”）條件下進行評價；如有干擾，應確定不產(chǎn)生干擾的賊高濃度。

5. 精密度

精密度評價應采用臨床樣本進行試驗，試驗操作有效按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等樣本處理步驟。樣本應至少涵蓋所有多態(tài)性位點的雜合突變型。

精密度評價需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進行驗證，除檢測試劑（包括核酸提取/純化組分）本身外，還包括分析儀、操作者、地點、時間、檢測輪次、試劑批次等。

5.2設定合理的精密度評價周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應選擇不同的實驗室進行重復實驗以對室間重復性進行評價。

5.3用于精密度評價的臨床樣本應根據(jù)可報告范圍的基因組DNA濃度至少設置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標可設置為檢測成功率等，申請人應對精密度指標評價標準做出合理要求。

精密度評價資料應詳述試驗設計、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析及試驗結果，列出有關試劑、儀器、實驗室、人員、樣本的相關信息。

（五）陽性判斷值確定資料

對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的檢測正確性的臨界值（Cut-off）。建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，涵蓋野生型和所有多態(tài)性位點的突變型，采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進行研究。相關資料中應詳述試驗方案、樣本來源、樣本量、樣本入組標準及試驗結果等。

應針對不同樣本類型（如有）分別進行陽性判斷值研究，明確是否有差異。

如果試劑判讀存在灰區(qū)，應解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應說明理由。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要包括申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件、保存時間等方面的研究，如果包括多種樣本類型，則需分別完成相關研究。

申報產(chǎn)品實時穩(wěn)定性研究中，應采用至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個時間點進行產(chǎn)品性能評價，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。

樣本穩(wěn)定性研究中，如核酸提取液不一定立即進行檢測，則還需對核酸提取液的保存條件和穩(wěn)定性進行研究。

申請人應提交有關穩(wěn)定性研究方案的確定依據(jù)、具體的試驗方法及詳細的研究數(shù)據(jù)、結論。

（七）臨床試驗

應滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，下面僅說明本類試劑臨床試驗中應關注的重點問題。

1. 臨床試驗機構

申請人應當選定不少于3家（含3家）臨床試驗機構，按照相關規(guī)定開展臨床試驗。申請人應根據(jù)產(chǎn)品特點及預期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學背景等因素選擇臨床試驗機構。

1. 臨床試驗人群

正在服用或?qū)⒁寐冗粮窭走M行抗血小板治療的冠心病患者，主要為急性冠脈綜合征（ACS）且進行經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）的患者（ACS/PCI患者）、PCI術后血栓高危且計劃調(diào)整P2Y12抑制劑治療方案的患者、缺血高風險或出血高風險患者等。其中，PCI術后血栓高危患者以及缺血高風險/出血高風險患者的人群限定可參考相關指南。

1. 臨床樣本

應為臨床原始樣本，如靜脈抗凝全血等，不應直接采用提取的基因組DNA進行試驗。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應同時滿足申報產(chǎn)品說明書以及對比試劑說明書（如適用）的相關要求。

1. 臨床試驗樣本量

如申報產(chǎn)品同時適用于靜脈全血或口腔拭子等不同基質(zhì)的樣本類型，則每種樣本類型的例數(shù)應分別滿足法規(guī)要求。

5. 臨床檢測正確性驗證

5.1 對比試劑

5.1.1已有同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

對于已批準的CYP2C19*2（rs4244285，c.681G>A）、CYP2C19*3（rs4986893，c.636G>A）以及CYP2C19*17（rs12248560,c.-806C>T）多態(tài)性位點，可選擇已上市同類試劑作為對比試劑。

5.1.2 無同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

對于新的多態(tài)性位點，可選擇基因測序作為對比方法。

5.1.3基因測序

應提交臨床試驗機構和測序機構簽章的委托測序協(xié)議。應對選用的測序方法做詳細介紹，應提供以下關于測序的詳細試驗資料，該部分資料需由臨床試驗機構簽章。

5.1.3.1測序原理、測序儀型號、測序試劑及消耗品的相關信息。

5.1.3.2測序方法所用引物信息，如核酸序列、分子量、純度、功能性實驗等資料。引物設計應涵蓋申報產(chǎn)品擴增的被測靶標。

5.1.3.3 測序方法的性能驗證，尤其是賊低檢測限的確認，建議將所選測序方法與申報產(chǎn)品的性能進行比對分析。

5.1.3.4 測序方法應建立合理的陽性和陰性質(zhì)控，以對臨床樣本的檢測結果進行質(zhì)量控制。

5.1.3.5 提交有代表性的樣本測序圖譜及結果分析資料。

6. 氯吡格雷指導用藥臨床有效性的驗證

6.1 已有同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

已批準的CYP2C19*2（rs4244285，c.681G>A）、CYP2C19*3（rs4986893，c.636G>A）以及CYP2C19*17（rs12248560,c.-806C>T）多態(tài)性位點，無需進行該部分驗證。

6.2 無同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

6.2.1如新多態(tài)性位點用于氯吡格雷用藥指導已獲行業(yè)承認（包括：CPIC、國內(nèi)相關指南或?qū)＜夜沧R、相關藥物說明書以及臨床應用等的承認），且有充分的中國人群的體內(nèi)臨床數(shù)據(jù)，無需進行該部分驗證。

6.2.2如新多態(tài)性位點用于氯吡格雷用藥指導未獲行業(yè)承認，應提交基于中國人群的充分的體內(nèi)臨床數(shù)據(jù)，包括但不限于：

6.2.2.1新的多態(tài)性位點等位基因編碼的CYP2C19酶對氯吡格雷的代謝動力學驗證資料。

6.2.2.2血小板功能檢測。比較不同基因型患者血小板功能的差異。

6.2.2.3基因型與主要不良心血管事件關聯(lián)性的體內(nèi)臨床試驗。

6.2.2.4基因型可指導氯吡格雷用藥的有效性證據(jù)。

6.2.3 需要強調(diào)的是，對于6.2所述申報產(chǎn)品（包括6.2.1和6.2.2），申請人應在臨床試驗資料部分提交聲稱的新多態(tài)性位點已獲行業(yè)承認的相關資料以及基于中國人群的充分的體內(nèi)臨床數(shù)據(jù)等，以證明申報產(chǎn)品可指導氯吡格雷用藥。

7. 臨床試驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析

7.1應在臨床試驗方案或報告中描述申報產(chǎn)品和對比試劑/方法的試驗方法。

7.2臨床試驗原始數(shù)據(jù)應以列表方式表示，包括申報產(chǎn)品的結果、對比試劑/方法的結果、臨床診斷、年齡、性別以及是否進行PCI等。

7.3應總結野生型、各多態(tài)性位點雜合型和純合突變型的例數(shù)，以交叉四格表分別總結兩種試劑對各多態(tài)性位點的定性檢測結果，并分別計算各多態(tài)性位點基因型的陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%置信區(qū)間，對定性結果分別進行四格表卡方或kappa檢驗，以驗證兩種試劑檢測結果的一致性。

7.4 結果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結果不一致的樣本，應采用合理方法進行復核，并對差異原因進行分析。如無需復核，應說明理由。

8. 臨床試驗方案

各臨床試驗機構的方案設置應基本一致，且高效在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程。

試驗方案應確定嚴格的入選/排除標準，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結果判定時應采用盲法以高效試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的對比試劑/方法應保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，申報產(chǎn)品的樣本類型不應超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

9. 臨床試驗報告

應對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。

（八）產(chǎn)品技術要求

產(chǎn)品技術要求應符合《辦法》《44號公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術要求正文后。

如果申報產(chǎn)品已有相應的國家/行業(yè)標準發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時應提交連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的檢驗報告。如有國家標準品/參考品的檢驗項目，應在產(chǎn)品檢驗時采用。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書應滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致。下面對CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行闡述。

1.【預期用途】應至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測人體xx樣本中的yy基因多態(tài)性，可檢測的多態(tài)性類型包括aa，本產(chǎn)品用于氯吡格雷的用藥指導。本產(chǎn)品不能預測患者對氯吡格雷的應答情況，僅能輔助醫(yī)生確定氯吡格雷治療策略。本產(chǎn)品檢測結果僅供臨床參考，不應作為患者是否用藥的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應結合患者病情、療效及其他實驗室檢測指標等對本產(chǎn)品的檢測結果進行綜合判斷。

1.2介紹被測靶標（基因多態(tài)性位點），明確各多態(tài)性雜合型和純合型的臨床發(fā)生頻率，明確可進行氯吡格雷用藥指導的適用人群，明確不同基因型與氯吡格雷的關系。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應列出相關試劑/耗材的名稱、貨號及其他相關信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應在此注明經(jīng)過驗證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號和醫(yī)療器械備案號（如有）等詳細信息。

3.【檢驗原理】

3.1對試劑盒的被測靶標進行詳細描述（基因位置、多態(tài)性位點及相關特征等），對試劑盒所用探針、引物、多態(tài)性的判定終點等進行詳細的介紹；對不同樣本反應管組合、質(zhì)控品設置及熒光信號檢測原理等進行介紹。

3.2試劑盒技術原理的詳細介紹，建議結合適當圖示進行說明。如反應體系中添加了相關的防污染組分（如UNG酶），也應對其作用機理進行適當介紹。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限（短期和長期）以及運送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關的重要信息以指導用戶操作。

7.【檢驗方法】

詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：

7.1實驗條件：實驗室分區(qū)、實驗環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項。

7.2試劑配制方法和注意事項。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進行合理的質(zhì)量控制，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

7.4擴增反應前準備：加樣體積、順序等。

7.5 PCR各階段的溫度、時間設置、循環(huán)數(shù)設置或相應的自動化檢測程序及相關注意事項。

7.6儀器設置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標記情況、對待測多態(tài)性及其他質(zhì)控品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗結果的解釋】

結合質(zhì)控品、樣本管檢測結果以及多態(tài)性類型與氯吡格雷表型之間的關系，以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結果及相應的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應詳述對于灰區(qū)結果的處理方式。

9.【檢驗方法的局限性】

9.1申報產(chǎn)品僅對下述多態(tài)性類型xx進行了驗證。

9.2有關假陰性結果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運送及處理或核酸過度降解均有可能導致假陰性結果。

9.2.2未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導致假陰性結果（如有）。

10.【產(chǎn)品性能指標】簡述以下性能指標：

10.1賊低檢測限：簡單介紹賊低檢測限的確定方法，并明確賊低檢測限結果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應驗證：同源性序列等交叉反應驗證。

10.4.2干擾物質(zhì)驗證：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結果的影響。

10.5對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學方法及統(tǒng)計分析結果。

11.【注意事項】應至少包括以下內(nèi)容：

11.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實驗室應嚴格按照《醫(yī)療機構臨床基因擴增實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號或現(xiàn)行有效版本）等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心。