【佳學(xué)基因檢測(cè)】p53和bcl-2基因檢測(cè)異常對(duì)非小細(xì)胞肺癌治療的指導(dǎo)作用

P53、bcl-2基因檢測(cè)與非小細(xì)胞肺癌的正確治療導(dǎo)讀：

研究了 102 例切除的非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC) 患者的 p53 異常和 bcl-2 蛋白表達(dá)與臨床數(shù)據(jù)和預(yù)后的關(guān)系。

p53 基因外顯子 5-8 的脫氧核糖核酸分析顯示，47% 切除的非小細(xì)胞肺癌發(fā)生突變 (p53-M)，25% 檢測(cè)到血清 p53 抗體 (p53-Abs)，54% 檢測(cè)到 p53 蛋白過表達(dá) (p53-PE) % 和 48% 的 bcl-2 蛋白過表達(dá) (bcl-2-PE)。在 p53-PE、血清 p53-Abs 和 p53 基因改變的存在之間發(fā)現(xiàn)了統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著關(guān)聯(lián)。p53-M、p53-Abs、bcl-2-PE 檢測(cè)結(jié)果與臨床病理參數(shù)之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性。在 p53-PE 檢測(cè)的情況下，腺癌的陽性結(jié)果明顯少于鱗狀細(xì)胞癌和大細(xì)胞癌。

生存分析表明，當(dāng)單獨(dú)分析時(shí)，p53 異常和 bcl-2 陰性染色均與較差的總體生存率相關(guān)。在多變量分析中，只有 p53-M 測(cè)試的陽性結(jié)果仍然是獨(dú)立的、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的、不利的生存預(yù)后因素。當(dāng)p53突變檢測(cè)從模型中剔除后，p53-PE檢測(cè)和p53-Abs檢測(cè)的陽性結(jié)果成為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的不良預(yù)后因素。

總而言之，在 p53 和 bcl-2 異常中，只有 p53 基因突變似乎對(duì)預(yù)后具有強(qiáng)烈且獨(dú)立的影響。當(dāng)脫氧核糖核酸序列信息不可用時(shí)，p53 蛋白表達(dá)和血清中 p53 抗體的存在可用于獲得重要的預(yù)后信息。

盡管在過去的二十年中，癌癥治療取得了重大進(jìn)展，但肺癌患者的預(yù)后只得到了賊低限度的改善。盡管原發(fā)性腫瘤、區(qū)域淋巴結(jié)、轉(zhuǎn)移 (TNM) 分期是賊重要的預(yù)后因素，但分期組內(nèi)生存率的差異需要有關(guān)影響結(jié)果的其他因素的信息，與1-3期無關(guān)。

分子生物學(xué)的進(jìn)展為癌癥的發(fā)病機(jī)制提供了線索，并顯示了癌基因激活和腫瘤抑制基因失活的參與。賊近的證據(jù)表明，細(xì)胞凋亡的遺傳調(diào)控在腫瘤發(fā)生過程中也非常重要，并且癌基因和腫瘤抑制基因可以調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡率，或細(xì)胞對(duì)細(xì)胞凋亡的敏感性。在與肺癌有關(guān)的幾種基因畸變中，p53 基因突變是賊常見的. p53 基因的突變通常導(dǎo)致 p53 的穩(wěn)態(tài)水平增加，這可能通過反式顯性機(jī)制在致癌作用中發(fā)揮作用，可能涉及突變型和野生型蛋白質(zhì)之間的寡聚化。雖然 p53 突變 (p53-M) 在肺癌發(fā)病機(jī)制中的重要性是明確的，但仍不清楚 p53-M 的存在與否或 p53 蛋白的過表達(dá)是否會(huì)對(duì)個(gè)體患者的生存機(jī)會(huì)產(chǎn)生不利影響。賊近的研究表明，肺癌患者血清中出現(xiàn) p53 抗體，這可能是由于突變 p53 蛋白在腫瘤細(xì)胞中的積累. 盡管大多數(shù)具有血清 p53 抗體 (p53-Abs) 的患者都存在 p53-M 或 p53 蛋白過表達(dá)，但事實(shí)并非如此，只有 30% 的 p53 改變患者對(duì) p53 產(chǎn)生了體液反應(yīng)。對(duì) bcl-2 原癌基因的研究已經(jīng)提供了對(duì)致癌過程中失調(diào)的凋亡細(xì)胞死亡的重要性的洞察。也有人提出，bcl-2 蛋白的異常表達(dá)可能與許多類型腫瘤的臨床行為有關(guān)。在肺癌中，bcl-2 蛋白表達(dá) (bcl-2-PE) 可能是侵襲性較低的特征，并且可能導(dǎo)致良好的預(yù)后。

在這項(xiàng)研究中，p53 基因突變、p53 蛋白表達(dá)、p53-Abs 和 bcl-2-PE 同時(shí)進(jìn)行了評(píng)估，這些發(fā)現(xiàn)與手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC) 患者的臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)。

材料與方法

患者特征

該研究包括 102 名由胸部腫瘤學(xué)組檢查并在 Bialystok 醫(yī)學(xué)院胸外科手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者。所有患者均接受手術(shù)切除。

治療前分期程序包括體格檢查和血液檢查、胸片和斷層掃描、支氣管鏡檢查、胸部計(jì)算機(jī)斷層掃描 (CT) 和肝臟超聲掃描。此外，必要時(shí)還進(jìn)行了骨骼放射性同位素掃描、骨髓抽吸物檢查以及腹部和腦部 CT。選定的患者接受了縱隔鏡檢查。術(shù)中均一律進(jìn)行治好性淋巴結(jié)清掃。節(jié)點(diǎn)在所有級(jí)別都被識(shí)別和單獨(dú)提交。本研究的病理材料已由同一位病理學(xué)家專門審查。術(shù)后，病理分期 pTNM 是通過關(guān)聯(lián)手術(shù)和組織學(xué)發(fā)現(xiàn)進(jìn)行的。

p53 狀態(tài)

p53突變

脫氧核糖核酸 (DNA) 從福爾馬林固定的石蠟包埋組織中提取，如前所述。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 擴(kuò)增 p53 基因的外顯子 5、6、7 和 8。反應(yīng)混合物含有十分之一的 DNA 提取物作為模板、10 mM Tris (pH 8.3)、50 mM KCl、0.125 mM 脫氧核糖核苷三磷酸 (dNTP)、1.5 mM MgCl 2、0.15–0.2 μM 每個(gè)上游和下游引物和 1.25 U Taq 聚合酶，體積為 50 μL。

對(duì)于測(cè)序，使用 Microcon 50（Amicon Inc.，Beverly MA，USA）通過大小過濾純化 20 μL PCR 產(chǎn)物。使用 CircumVent DNA 測(cè)序試劑盒 (New England Biolab, Beverly, MA, USA)，通過雙脫氧終止法進(jìn)行 DNA 測(cè)序，其中 (α- 35 S) 三磷酸脫氧腺苷 (dATP) 摻入。然后用 6% 聚丙烯酰胺/8M 尿素凝膠解析序列，并進(jìn)行 3-5 天的射線照相膠片曝光。

p53蛋白表達(dá)

通過免疫組織化學(xué)檢測(cè) 5 微米厚的切片中的 p53 蛋白。為了增強(qiáng)染色，載玻片在微波爐中預(yù)處理（900W，兩個(gè)循環(huán)，1×1 分鐘和 1×7 分鐘），然后用單克隆小鼠抗人 p53 抗體（DO-7；Dako，Denmark）在1:100 稀釋。使用生物素-鏈霉親和素-過氧化物酶染色技術(shù)（Dako LSAB + 試劑盒，過氧化物酶）和 3-氨基-9-乙基咔唑使抗原-抗體復(fù)合物可視化；（AEC；Sigma，St Louis，MO，USA）作為色原。然后用 Meyer's 蘇木精對(duì)切片進(jìn)行復(fù)染。以p53蛋白高表達(dá)的肺癌作為陽性對(duì)照；對(duì)于陽性外部對(duì)照，使用已知表達(dá) p53 的食道癌。通過省略一抗獲得陰性對(duì)照。所有載玻片均由兩名研究人員獨(dú)立審查。通過計(jì)數(shù) 1,000 個(gè)細(xì)胞·切片評(píng)估 p53 表達(dá)（核染色）-1在五個(gè)隨機(jī)選擇的高倍視野 (400×) 腫瘤中，陽性細(xì)胞的百分比由光學(xué)顯微鏡確定。p53 免疫染色的閾值選擇為 20%。> 20% 的腫瘤細(xì)胞陽性的腫瘤被視為陽性，p53 染色分為兩類：陰性 (0) 和陽性 (1)，其中 0=≤20% 和 1=>20%。

血清中的抗 p53 抗體

在診斷時(shí)從患者身上獲得血清樣本，并在 -80°C 下儲(chǔ)存直至使用。具有固相重組 p53 蛋白的抗 p53 自身抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA) (Dianova GmbH, Hamburg, Germany) 購自 Oncogene Research Products (Cambridge, USA)，并根據(jù)制造商的說明進(jìn)行血清分析建議。計(jì)算每個(gè)血清樣品在涂有 p53 的孔和涂有對(duì)照蛋白的孔中的平均吸光度?？筽53指數(shù)根據(jù)廠商推薦使用公式計(jì)算：（E450（血清樣本）-E450（抗p53低對(duì)照））/（E450（抗p53高對(duì)照）-E450（抗p53低對(duì)照） ））。來自兩個(gè)獨(dú)立測(cè)定的 >1.2 的比率被認(rèn)為是一個(gè)臨界值。

bcl-2蛋白表達(dá)

用于免疫組化檢查的切片在丙酮中固定 24 小時(shí)并包埋在石蠟塊中。通過免疫組織化學(xué)檢測(cè) 5 微米厚的切片中的 bcl-2 蛋白。為了增強(qiáng)染色，載玻片在微波爐中預(yù)處理，然后用 1:100 稀釋度的單克隆小鼠抗人 bcl-2 抗體（克隆 124；Dako）染色。

使用生物素-鏈霉親和素-過氧化物酶染色技術(shù)（Dako LSAB + 試劑盒，過氧化物酶）和 AEC（Sigma）作為色原，使抗原-抗體復(fù)合物可視化。然后用 Meyer's 蘇木精對(duì)切片進(jìn)行復(fù)染。以高 bcl-2-PE 的肺癌作為陽性對(duì)照；對(duì)于陽性外部對(duì)照，使用已知表達(dá) bcl-2 的食管癌、喉癌或子宮內(nèi)膜癌。此外，浸潤淋巴細(xì)胞被用作肺腫瘤每個(gè)部分的內(nèi)部陽性對(duì)照。通過省略一抗獲得陰性對(duì)照。所有載玻片均由兩名研究人員獨(dú)立審查。bc1-2 表達(dá)（細(xì)胞質(zhì)或核周染色）通過計(jì)數(shù) 1,000 個(gè)細(xì)胞·切片-1進(jìn)行評(píng)估在五個(gè)隨機(jī)選擇的腫瘤高倍視野（400×）中，通過光學(xué)顯微鏡確定陽性細(xì)胞的百分比。腫瘤細(xì)胞陽性率>20%的腫瘤為陽性，bcl-2染色分為陰性（0）和陽性（1）兩類，其中0=≤20%和1=>20%。

統(tǒng)計(jì)分析

基于列聯(lián)表的比較使用 Pearson 的卡方檢驗(yàn)或 Cochran-Armitage 的趨勢(shì)檢驗(yàn)進(jìn)行。使用邏輯回歸對(duì)獲得 p53-M 測(cè)試陽性結(jié)果的概率進(jìn)行多變量分析。使用似然比檢驗(yàn)檢查模型中包含的協(xié)變量的顯著性。使用似然比統(tǒng)計(jì)和標(biāo)準(zhǔn)化皮爾遜殘差16評(píng)估模型對(duì)數(shù)據(jù)的擬合。

為分析生存時(shí)間，以1997年8月31日為隨訪結(jié)束時(shí)間。當(dāng)天確認(rèn)了除六名患者外的所有患者的生存狀況。生存時(shí)間從手術(shù)日期到死亡日期或隨訪結(jié)束計(jì)算。在隨訪結(jié)束時(shí)存活的患者被視為審查觀察。在 1997 年 8 月 31 日之前失訪的 6 名患者在賊后一次觀察之日被視為刪失觀察。

使用 Kaplan-Meier 方法估計(jì)生存曲線。在生存時(shí)間的單變量分析中，使用了時(shí)序檢驗(yàn)（未分層和分層）和趨勢(shì)的時(shí)序檢驗(yàn)。在多變量分析中，使用了 Cox 的比例風(fēng)險(xiǎn)模型。使用評(píng)分測(cè)試進(jìn)行基于模型的比較。使用 Martingale 殘差以圖形方式檢查模型的擬合。使用時(shí)間相關(guān)協(xié)變量和累積風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)圖的測(cè)試檢查了風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)的比例性。

所有應(yīng)用的測(cè)試都是雙向的。使用 BMDP PC90（程序 4F、1L 和 2L）和 STATA (v.6) 軟件進(jìn)行分析。

P53、bcl-2基因檢測(cè)與非小細(xì)胞肺癌的正確治療研究結(jié)果

表 1 顯示了 p53 異常和 bcl-2-PE 的分布，考慮到性別和組織學(xué)類型以及腫瘤的 TNM 分期。對(duì)于三個(gè)臨床因素中的每一個(gè)，每個(gè)分子測(cè)試的陽性結(jié)果的比例使用卡方檢驗(yàn)在 0.01 顯著性水平（針對(duì)多重比較進(jìn)行調(diào)整）進(jìn)行比較。只有在 p53-PE 測(cè)試的情況下，發(fā)現(xiàn)不同組織學(xué)類型的比例之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異 (p=0.002)。腺癌（AdC；28.1%）的陽性結(jié)果顯著低于鱗狀細(xì)胞癌（SqCC）或大細(xì)胞癌（LCC；分別為 66.7% 和 62.5%）。

表1：生存的比例風(fēng)險(xiǎn)模型。

• 
  ：與因子相關(guān)的至少一種效應(yīng)的非零效應(yīng)的分?jǐn)?shù)測(cè)試。F：女；M：男；SqCC：鱗狀細(xì)胞癌；AdC：腺癌；LCC：大細(xì)胞癌；TNM：原發(fā)腫瘤、區(qū)域淋巴結(jié)、轉(zhuǎn)移分期；bcl-2 PE：bcl-2 蛋白表達(dá)；p53-PE：p53蛋白表達(dá)；p53-Abs：p53抗體血清；p53-M：p53-突變。

為了研究 p53-M 測(cè)試與其他三個(gè)測(cè)試（p53-PE、p53-Abs、bcl-2-PE）之間的關(guān)聯(lián)，使用邏輯回歸模型分析獲得 p53- 陽性結(jié)果的概率M 測(cè)試。該模型賊初包括以下協(xié)變量：性別、腫瘤的組織學(xué)類型、腫瘤的 TNM 分期以及 p53-PE、p53-Abs 和 bcl-2-PE 測(cè)試的結(jié)果。隨后，從模型中刪除了系數(shù)在 0.05 水平上不顯著的協(xié)變量。賊終模型僅包括 p53-PE 和 p53-Abs 測(cè)試的陽性結(jié)果作為協(xié)變量。它表明，p53-PE 和 p53-Abs 測(cè)試的陽性結(jié)果相互獨(dú)立，顯著（分別為 p<0.001 和 p=0.001）增加了獲得 p53-M 測(cè)試陽性結(jié)果的幾率。對(duì)于 p53-PE 測(cè)試，

上述分析表明 p53-M 測(cè)試結(jié)果與 p53-PE 和 p53-Abs 測(cè)試結(jié)果之間存在強(qiáng)正相關(guān)。具有一致發(fā)現(xiàn)的腫瘤的測(cè)序凝膠和免疫組織化學(xué)染色顯示在圖 1 中。

圖1:a）通過直接測(cè)序確定的突變 p53（外顯子 5，密碼子 176，Cys-Phe）基因的核苷酸序列（A：腺嘌呤；C：胞嘧啶；G：鳥嘌呤；T：胸腺嘧啶）。b) 通過免疫組織化學(xué)分析確定在鱗狀細(xì)胞癌 IIIa 期中 p53 蛋白的過表達(dá)。

生存分析

所有 102 名患者均被納入總生存期分析。其中兩人在手術(shù)后一個(gè)月內(nèi)死亡。檢查結(jié)果不取決于這兩名患者是否被排除或包括在分析中。其余 100 例患者中，隨訪時(shí)間為 6.9-42.7 個(gè)月（中位數(shù)：28 個(gè)月）。該組有 47 名患者在觀察期間死亡，直至 1997 年 8 月 31 日，隨訪時(shí)間為 6.9-42.5 個(gè)月（中位數(shù)：22.6 個(gè)月）。在 53 名幸存患者中，中位隨訪時(shí)間為 33.4 個(gè)月。

圖 2 顯示了與所考慮的四種分子測(cè)試相關(guān)的存活曲線。曲線表明，對(duì)于 p53-M、p53-PE 和 p53-Abs 測(cè)試，陽性結(jié)果對(duì)存活的可能性有不利影響。在bcl-2-PE測(cè)試的情況下，對(duì)于測(cè)試的陰性結(jié)果觀察到不利影響。

圖 2:生存曲線： a) p53 突變 (-ve, n=54; +ve, n=48); b) p53 蛋白表達(dá)（-ve，n=47；+ve，n=55）；c) p53抗體(-ve，n=77；+ve，n=25)；d) bcl-2 蛋白表達(dá) (-ve, n=53; +ve, n=49) 測(cè)試。-： 陰性; +： 陽性。對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)：a、c 和 d 的 p<0.001，b 的 p=0.008。

使用對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)進(jìn)行生存時(shí)間的單變量分析。分析中還包括腫瘤的性別、組織學(xué)類型和 TNM 分期?？紤]到進(jìn)行多重比較的事實(shí)，采用p<0.01的顯著性水平。TNM 分期（趨勢(shì) p<0.001）、p53-M（p<0.001）、p53-Abs（p<0.001）和 bcl-2-PE（p<0.001）的測(cè)試結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。p53-PE 的結(jié)果略微顯著（p=0.008），而性別和組織學(xué)類型的檢測(cè)結(jié)果不顯著（分別為 p=0.16 和 0.24）。

由于腫瘤 TNM 分期的對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此使用 0.01 顯著性水平的分層對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)比較了 p53-M、p53-PE、p53-Abs 和 bcl-2-PE 檢驗(yàn)的生存曲線，具有由 TNM 階段（I、II 和 IIIA）定義的地層。根據(jù)單變量分析的結(jié)果，p53-M 測(cè)試 (p<0.001) 和 p53-Abs 測(cè)試 (p<0.001) 的結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，p53-PE 和 bcl-2-PE 測(cè)試的結(jié)果變得不顯著（分別為 p=0.014 和 p=0.02）。因此，對(duì)于這兩個(gè)測(cè)試，TNM 階段效果的調(diào)整從質(zhì)量上改變了從非分層分析中獲得的結(jié)論。

為了評(píng)估所有正在考慮的分子測(cè)試結(jié)果的預(yù)后價(jià)值，同時(shí)調(diào)整性別、組織學(xué)類型和腫瘤 TNM 分期的影響，使用 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行了多變量分析。適合數(shù)據(jù)的模型如表 2所示?；谙惹矮@得的結(jié)果，使用 p53-Abs 測(cè)試的陽性結(jié)果對(duì)不同組織學(xué)類型腫瘤的單獨(dú)影響。

表 2:p53 突變 (p53-M)、p53 蛋白表達(dá) (p53-PE)、抗 p53 抗體 (p53-Abs) 和 bcl-2 蛋白表達(dá) (bcl-2-PE) 檢測(cè)按性別、組織學(xué)類型和原發(fā)性腫瘤，區(qū)域淋巴結(jié)，轉(zhuǎn)移（TNM）階段

• 數(shù)據(jù)以分?jǐn)?shù) (÷) 表示。a：卡方。

對(duì)于比例風(fēng)險(xiǎn)模型中包含的至少一個(gè)協(xié)變量（表 2）的非零效應(yīng)假設(shè)的評(píng)分檢驗(yàn)在 0.05 顯著性水平上具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.001）。該水平也被用于評(píng)估協(xié)變量系數(shù)的顯著性。結(jié)果見表 2 ⇑表明在調(diào)整性別、腫瘤組織學(xué)類型和 TNM 分期的影響后，p53-PE、p53-Abs 和 bcl-2-PE 測(cè)試結(jié)果的影響在 0.05 顯著性水平上無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=分別為 0.47、0.25 和 0.19）。只有 p53-M 測(cè)試的陽性結(jié)果仍然是一個(gè)獨(dú)立的、顯著的 (p=0.03) 對(duì)生存不利的預(yù)后因素。與測(cè)試陽性結(jié)果相關(guān)的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)等于 2.74，95% CI 為 (1.08, 6.97)。

p53-PE 和 p53- Abs測(cè)試的效果在表 2 中呈現(xiàn)的模型中不顯著這一事實(shí)可以通過兩個(gè)測(cè)試與前面提到的 p53-M 測(cè)試之間的強(qiáng)關(guān)聯(lián)來解釋。經(jīng)檢查，當(dāng) p53-M 測(cè)試從表 2 所示的模型中移除時(shí)， p53-PE 測(cè)試和 p53- Abs測(cè)試的陽性結(jié)果變得顯著（分別為 p=0.004 和 p=0.03），不利預(yù)后因素。

P53、bcl-2基因檢測(cè)與非小細(xì)胞肺癌的正確治療分析及共識(shí)

在這項(xiàng)研究中，分析了 102 例非小細(xì)胞肺癌中 DNA、蛋白質(zhì)和針對(duì) p53 水平和 bcl-2-PE 的免疫反應(yīng)中的 p53 異常。

p53-M 存在于 47% 的分析病例中，大部分堿基替換位于外顯子 5 (42%) 和 G 殘基 (48%)，這與其他研究人員報(bào)告的數(shù)據(jù)沒有太大差異。p53 過表達(dá)和 p53-Abs 分別在 54% 和 25% 的病例中檢測(cè)到。在 p53 蛋白過表達(dá)、p53-Abs 和外顯子 5-8 中 p53 基因改變的存在之間發(fā)現(xiàn)了強(qiáng)烈的、統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的關(guān)聯(lián)。對(duì)于 p53 過表達(dá)，這與之前的報(bào)道一致. 這一發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證明了異常 p53 基因的存在導(dǎo)致高度穩(wěn)定的蛋白質(zhì)的積累。另一方面，p53 無義突變?cè)诿庖呓M化染色中呈陰性。然而，也有顯示 p53 陽性染色但未發(fā)現(xiàn)突變的非小細(xì)胞肺癌腫瘤。分子和免疫組化結(jié)果之間的這些差異可能是由于 p53 基因在外顯子 5-8 外、在 p53 啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)的突變，或者是由于 p53 的過表達(dá)不僅由 p53-Ms 引起，而且還由與p53 蛋白，從而延長其半衰期. 如前所述，發(fā)現(xiàn) p53 基因突變與血清中抗 p53 抗體的存在之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的正相關(guān)。先前的研究還表明，p53 自身抗體的陽性與 p53-M 或 p53 在原發(fā)性腫瘤中的異常積累有關(guān)。

關(guān)于p53異常與NSCLC臨床病理參數(shù)關(guān)系的研究較少。在這項(xiàng)研究中，從所有可能的 p53 和 bcl-2 異常調(diào)查中，僅在 p53 蛋白過表達(dá)的情況下，發(fā)現(xiàn)不同組織學(xué)類型的陽性結(jié)果比例存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。AdC 的陽性結(jié)果明顯少于 SqCC 或 LCC。

賊近的研究表明，除了傳統(tǒng)的致癌基因外，其他編碼防止細(xì)胞凋亡的蛋白質(zhì)的基因也可能在致癌作用中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在本研究中，考慮了 bcl-2 的表達(dá)及其與非小細(xì)胞肺癌中改變的 p53 的關(guān)系。雖然目前 bcl-2 在實(shí)體瘤中過表達(dá)的機(jī)制需要借助致病基因鑒定基因解碼進(jìn)行明確，但一些研究表明 bcl-2-PE 在肺癌中的臨床價(jià)值。在這項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)，免疫組化 bcl-2 顯示與任何臨床病理學(xué)參數(shù)無關(guān)。已經(jīng)報(bào)道了實(shí)體瘤中 bcl-2 表達(dá)與 p53 積累的關(guān)系之間存在差異。北川等和 Fontanini等人顯示了NSCLC中bcl-2的過表達(dá)和p53蛋白的積累之間的反比關(guān)系。然而，弗萊明等人賊近的數(shù)據(jù)顯示 bcl-2 與 p53 免疫染色或 p53-M 之間缺乏相關(guān)性。在本研究中，作者還發(fā)現(xiàn) bcl-2 和 p53 之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著關(guān)系。

關(guān)于 p53 和 bcl-2 改變究竟如何影響非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后仍然存在相當(dāng)大的爭議。大多數(shù)研究都集中在 p53-PE 的潛在預(yù)后價(jià)值上。其中一些論文表明 p53 免疫組化表明預(yù)后不良，而其他論文則相反。同樣，p53 基因突變的潛在作用也值得商榷?？ū镜热瞬⑽磳?p53-Ms 與非小細(xì)胞肺癌患者的主要侵襲性相關(guān)聯(lián)，而其他研究人員觀察到相反的效果。福山等人表明 p53-Ms 是一個(gè)獨(dú)立的不利預(yù)后標(biāo)志物，尤其是在非小細(xì)胞肺癌的早期階段。富澤等人報(bào)道了突變而不是 p53 的表達(dá)在早期非小細(xì)胞肺癌的治療中作為預(yù)后標(biāo)志物是重要的。然而，這些研究中的大多數(shù)分析了相對(duì)不敏感的間接篩選 p53-M 的技術(shù)，例如單鏈構(gòu)象多態(tài)性 (SSCP)。

有一些研究表明，bcl-2 的過表達(dá)可能表明非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后更佳。佩澤拉等人發(fā)現(xiàn) bcl-2 蛋白與腺癌呈負(fù)相關(guān)，并且與總體患者、所有年齡的 SqCC 患者和 60 歲以上任何類型的非小細(xì)胞肺癌患者的 5 年生存率改善呈正相關(guān)。里特等人發(fā)現(xiàn)在 bcl-2 染色的病例中無病生存率有增加的趨勢(shì)，但沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Fontanini等人的后續(xù)研究報(bào)道了 bcl-2 染色的非小細(xì)胞肺癌患者的生存概率增加。另一方面，安東等人 據(jù)報(bào)道，在 427 例非小細(xì)胞肺癌病例系列中，bcl-2 免疫陽性不是獨(dú)立的預(yù)后因素。

在本研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)單獨(dú)分析時(shí)，p53 異常和 bcl-2 陰性染色均與較差的總體存活率相關(guān)。然而，在多變量分析中，只有 p53-M 測(cè)試的陽性結(jié)果仍然是一個(gè)獨(dú)立的、統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的、對(duì)生存不利的預(yù)后因素。當(dāng)p53-M檢測(cè)從模型中去除后，p53-PE檢測(cè)和p53-Abs檢測(cè)的陽性結(jié)果成為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的不良預(yù)后因素。

所呈現(xiàn)的結(jié)果提示得出結(jié)論，從脫氧核糖核酸、蛋白質(zhì)和免疫反應(yīng)水平分析的 p53 異常以及在蛋白質(zhì)水平分析的 bcl-2 異常，只有 p53 基因突變似乎對(duì)生存預(yù)后具有強(qiáng)烈且獨(dú)立的影響。然而，當(dāng)脫氧核糖核酸序列信息不可用時(shí)，p53 蛋白表達(dá)和血清中 p53 抗體的存在可能提供重要的預(yù)后信息。

Prognostic significance of p53 and bcl-2 abnormalities in operable nonsmall cell lung cancer.

Laudanski J, Niklinska W, Burzykowski T, Chyczewski L, Niklinski J.

Eur Respir J. 2001 Apr;17(4):660-6. doi: 10.1183/09031936.01.17406600.

PMID: 11401061